Ada hampir semua perusahaan yang menjualbubuk enzim bromelaindicampur dengan papain. Sulit untuk memurnikan bromelain menjadi 5000GDU/g. tetapi sangat mudah untuk memurnikan papain menjadi 1000,000GDU/g. bahkan hingga 2000.000GDU/g. namun fungsi bromelain berbeda dengan papain. warna, bau, kelarutan air, dan rasa kontras dengan produk palsu dan produk asli. Perbedaannya adalah bubuk enzim bromelain yang tepat berwarna abu-abu, tidak berbau, tidak berasa dan tidak larut dalam air.
Tetapi bromelain palsu memiliki ciri-ciri sebagai berikut:
● Warnanya kuning muda, aromatik dan agak manis, serta larut dalam air. Ini adalah karakteristik papain.
● Digunakan untuk mengurangi peradangan dan menghilangkan rasa sakit. tetapi hampir tidak ada fungsi ini di papain.
● Ini hanya digunakan sebagai suplemen makanan, bukan bahan tambahan makanan, tapi memang bisa menjadi kelas farmasi. Namun papain hanya digunakan sebagai bubuk pelunak daging dan kosmetik.
Kami menguji bromelain menurut gel SDS-PAGE dan metode GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL dan HPLC, ada sedikit molekul target dalam metode gel SDS-PAGE untuk produk palsu.
Berikut adalah hasil elektroforesis Halaman SDS
Bintik di atas menunjukkan bahwa hanya produk yang tepat yang memiliki bintik yang sama di tempat yang tepat pada gambar, tetapi produk palsu memiliki bintik kecil di atasnya, yang berarti berat molekulnya hampir tidak terlihat.
Berat molekul Bromelain adalah sekitar 33000, tetapi berat molekul papain adalah 21000. Dan Kromatogram HPLC:
Anda akan melihat bahwa hanya ekstrak yang tepat yang mengandung berat molekul bromelain yang tepat dan dapat dideteksi oleh HPLC.
Tetapi jika kita hanya diuji dengan Metode Analitik Unit Pencernaan Gelatin (GDU) lihat Lampiran II. Produk yang benar dan yang salah memiliki hasil yang sama seperti di bawah ini:
Batang nanas sangat murah, dan laju dari batang ke bromelain sangat rendah, ada beberapa polusi dalam proses pembuatannya.
Hampir semua pabrik bubuk enzim bromelain berada di dekat lapangan. Mereka menggunakan batang segar. Tidak mungkin mengirim batang dalam jarak jauh. Bahan mentah harus ditangani sesegera mungkin saat dikumpulkan dari lapangan atau harus disimpan di lingkungan suhu rendah (4-8 derajat ) untuk menghindari degradasi protein. Dalam kehidupan nyata, pabrikan sebenarnya tidak dapat memenuhi salah satu dari dua kondisi di atas karena terlalu banyak batang nanas. Metode yang masuk akal adalah keseimbangan antara waktu penanganan dan kehilangan aktivitas protein. Biasanya, pembuatan bahan baku mentah di musim panen Nanas, dan menyimpan bahan baku mentah di lingkungan bersuhu rendah (4-8 derajat ).
Kami sedang melakukan beberapa pengujian tentang elektroforesis Halaman SDS, Secara teori kami dapat menaikkannya menjadi 10,000 atau 20,000.tetapi biayanya akan sangat mahal. 5000GDU/g dan membuatnya stabil mungkin pada dukungan malto / mikroenkapsulasi atau sesuatu ditambah ekstraksi / pemurnian kelas organik.
Lampiran I
● Metode 5 elektroforesis gel poliakrilamida SDS (SDS-PAGE)
SDS-PAGE adalah metode elektroforesis gel poliakrilamid terdenaturasi. Prinsip pemisahan protein dalam metode ini didasarkan pada fakta bahwa sebagian besar protein dapat bergabung dengan surfaktan anionik natrium dodesil sulfat (SDS) dalam rasio berat untuk membentuk kompleks.
Muatan negatif yang dibawa oleh molekul protein jauh melebihi muatan bersih molekul protein alami, menghilangkan efek muatan dari molekul protein yang berbeda dan memisahkan protein berdasarkan ukuran molekulnya.
Metode ini digunakan untuk identifikasi kualitatif, kontrol kemurnian dan ketidakmurnian, dan penentuan kuantitatif protein.
1 Perangkat instrumen
Catu daya tegangan konstan atau arus konstan, tangki elektroforesis pelat vertikal, dan cetakan pembuat perekat.
2. Reagen
(1) Air.
(2) Buffer gel pemisahan (4x, larutan A) 1,5 mol/L buffer asam hidroklorat trihidroksimetil aminometana. Timbang 18,15 g trihidroksimetil aminometana dan larutkan dengan air secukupnya. Sesuaikan nilai pH menjadi 88 dengan asam klorida dan encerkan hingga 100ml dengan air.
(3) Timbang 58.0g akrilamida dan 20g N, N '- metilena bisakrilamida dalam larutan akrilamida 30 persen (larutan B), larutkan dalam air hangat dan encerkan hingga 200ml, saring dengan kertas saring (simpan dalam gelap).
(4) Timbang 10g natrium dodesil sulfat dalam larutan SDS 10 persen (larutan C), larutkan dalam air, dan encerkan hingga 100ml
(5) Reagen komersialisasi larutan tetramethylethylenediamine (larutan TEMED, D).
Larutan amonium persulfat 10 persen (larutan E) Timbang 10 g amonium persulfat, larutkan dalam air, dan encerkan hingga 100 ml. Disarankan untuk menyiapkannya sebelum digunakan atau menyimpannya secara terpisah pada -20 derajat selama 2 minggu.
(7) Buffer karet pekat (4 ×, larutan F) 0.5mol/L Trihydroxymethylaminomethane Hydrochloric acid buffer, timbang 6.05g Trihydroxymethylaminomethane, tambahkan air secukupnya untuk larut, sesuaikan nilai pH menjadi 6,8 dengan hidroklorik asam, dan encerkan dengan air hingga 100 ml.
(8) Buffer elektroda (10 ×) Timbang 30g trimetilaminometana, 144g glisin, dan 10g natrium dodesil sulfat, larutkan dalam air dan encerkan hingga sekitar 800ml. Sesuaikan nilai pH menjadi 8.1-8.8 dengan asam klorida, dan encerkan hingga 1000ml dengan air.
(9) Buffer sampel yang tidak tereduksi (4 ×) Timbang 303g trimetilaminometana, 20mg bromofenol biru, dan 8,0g natrium dodesil sulfat, ukur 40ml gliserol, larutkan dalam air dan encerkan hingga sekitar 80ml. Sesuaikan pH hingga 68 dengan asam klorida, dan encerkan hingga 100ml dengan air.
(8) Buffer elektroda (10 ×) Timbang 30g trimetilaminometana, 144g glisin, dan 10g natrium dodesil sulfat, larutkan dalam air dan encerkan hingga sekitar 800ml. Sesuaikan nilai DH menjadi 81-88 dengan asam klorida, dan encerkan hingga 1000ml dengan air
(9) Penyangga sampel yang tidak tereduksi (4 ×) Timbang 3,03 g trimetilaminometana, 20 mg bromofenol biru, dan 80 g natrium dodesil sulfat, ukur 40 ml gliserol, larutkan dalam air, dan encerkan hingga sekitar 80 ml. Sesuaikan pH menjadi 6,8 dengan asam klorida, dan encerkan hingga 100ml dengan air.
(10) Pengurangan buffer zat uji (4 ×) Timbang 3,03 g trimetilaminometana, 20 mg bromofenol biru, dan 80 g natrium dodesil sulfat, ukur 40 ml gliserol, larutkan dan encerkan dengan air hingga sekitar 80 ml, dan tambahkan - 20ml merkaptoetanol, sesuaikan pH menjadi 6,8 dengan asam klorida, encerkan dengan air hingga 100ml (atau 3,03g trimetilaminometana, 20mg bromofenol biru, 8,0g natrium dodesil sulfat, takar 40ml gliserol, larutkan dalam air dan encerkan menjadi 80ml, sesuaikan pH menjadi 6,8 dengan asam klorida, encerkan dengan air hingga 100ml, dan sebelum digunakan, tambahkan dithiothreitol hingga 100mmol/L).
● Lampiran II
Unit Pencernaan Gelatin Metode Analitik (GDU)
A. Tujuan: Prosedur ini digunakan untuk menentukan aktivitas proteolitik Serbuk Enzim Bromelain.
B.Peralatan:
1. Pengukur pH
2. Pemandian Air Suhu Konstan pada 45.0 derajat ± 0.1 derajat
3. Neraca Analitik
4. Labu ukur
5. Pipet volumetrik
6. Pengatur waktu
7. Buret Digital (Akurasi 0.1 ml)
8. Lemari asam
9. Pipetter Otomatis
C. Tindakan Pengamanan:
Tes ini harus dilakukan di lemari asam.
1. Gunakan praktik keselamatan laboratorium standar.
2. Formaldehida: Siapkan dan simpan dalam lemari asam setiap saat. Dikenal karsinogen dan teratogen.
3. Peroksida: Pengoksidasi kuat
D. Reagen dan Persiapan Reagen:
1. Air suling: kira-kira 500 ml: sesuaikan ke pH 4,5 dengan 0,1 N HCI.
2. Substrat agar-agar:
A. Larutkan 25 gram agar-agar (Mikrobiologie.1.04070) dalam 375 ml air panas, didihkan. Dinginkan hingga 45 derajat.
B. Sesuaikan pH menjadi 4,5 dengan 0.1 N HCI dan encerkan menjadi 500 ml air suling pH 4,5.
C. Jauhkan substrat gelatin pada 45 derajat.
3. Solusi Penyangga:
A. Tambahkan 15 gm NaCl perlahan ke 40-50 ml air dalam gelas kimia 150ml dan aduk hingga larut.
B. Tambahkan 0.570 ml asam asetat.
C. Sesuaikan pH menjadi 4,5 dengan 0.2N HCL (volume akan lebih besar dari 100ml.)
4. 3 persen Hidrogen peroksida:
A. Pipet 2,5 ml Hidrogen peroksida 30 persen (larutan stok) ke dalam labu ukur 25 ml dan encerkan dengan air suling pH 4,5 hingga tanda batas
5. 37 persen Formaldehida pH 9.0: a. Sesuaikan volume yang cukup (100 ml) formaldehida hingga pH 9,0 dengan NaOH 0,1 N (sekitar 20 ml formaldehida per sampel sebelum penyesuaian pH.)
Metode Analitik Unit Pencernaan Gelatin (GDU) - lanjutan.
6. 0.100 N NaOH: (Dibeli standar) a. Larutan stok: distandarisasi pada 0,100 N
E. Prosedur:
1. Persiapan Enzim:
A. Menghitung Persiapan Enzim
Berat {{0}}/Target aktivitas (sekitar 0,05 g atau 50 mg)
A. Timbang enzim dengan tepat ke dalam labu ukur 50 ml
B. Tambahkan 8,3 ml larutan penyangga.
B. Diamkan selama 30 menit pada suhu kamar.
C. Encerkan hingga 50 ml menggunakan air suling pH 4,5, tambahkan batang pengaduk kecil dan aduk lagi selama 10 hingga 15 menit
2. Prosedur Enzim:
A. Pipet 25 ml substrat Gelatin ke masing-masing dua gelas kimia 100 ml yang berisi batang pengaduk dan tempatkan dalam penangas air pada suhu 45 derajat selama 5 menit, satu untuk Larutan Uji dan yang lainnya untuk Larutan Kosong.
B. Solusi Uji:
1) Tambahkan 1.0 ml larutan bubuk enzim bromelain ke dalam gelas kimia yang ditujukan untuk larutan uji, mulai waktu dan aduk.
2) Setelah tepat 20 menit inkubasi pada suhu 45 derajat , tambahkan 0,1 ml hidrogen peroksida 3 persen dan aduk.
3) Inkubasi selama 5 menit tambahan.
4) Keluarkan gelas kimia dari penangas air dan dengan pengadukan konstan masukkan probe pH.
5) Catat pH setelah 10 detik (pH Awal)
6) Sesuaikan ke pH 6.0 dengan 0.1 N NaOH. (Sekitar 2-4 ml)
*Catatan: Saat menyesuaikan pH ke 6.0 hati-hati pada pH 5,8; pH meningkat perlahan dan penambahan menit NaOH pada titik ini akan meningkatkan pH secara signifikan.
7) Melanjutkan pengadukan konstan, tambahkan 10 ml formaldehida 37 persen pH 9,0.
8) Catat pH setelah 10 detik dan 1 menit.
9) Titrasi hingga pH 9.0 dengan 0.1 N NaOH.
10) Catat volume titrasi.
Ini adalah titer uji, T. c.
Solusi Kosong: Solusi Kosong harus dijalankan bersamaan dengan solusi Tes. Hal ini dilakukan dengan memulai penetapan Larutan Kosong 12 menit setelah Larutan Uji dimulai. Itu memberi Anda waktu untuk menyelesaikan pengujian pada Larutan Uji sebelum harus melanjutkan dengan Larutan Kosong. 1) Tambahkan 0.1 ml hidrogen peroksida 3 persen ke dalam gelas kimia yang ditujukan untuk larutan blanko dan aduk.
2) Setelah tepat 20 menit inkubasi pada suhu 45 derajat, tambahkan 1,0 ml larutan bromelain dan aduk.
3) Inkubasi selama 5 menit tambahan.
METODE ANALISIS UNIT PENCERNAAN GELATIN (GDU) - lanjutan.
4) Keluarkan gelas kimia dari penangas air dan dengan pengadukan konstan masukkan probe pH.
5) Catat pH setelah 10 detik (pH Awal)
6) Sesuaikan ke pH 6.0 dengan 0.1 N NaOH. (Sekitar 2-4 ml)*Lihat Catatan di atas.
7) Melanjutkan pengadukan konstan, tambahkan 10 ml formaldehida 37 persen pH 9,0.
8) Catat pH setelah 10 detik dan 1 menit.
9) Titrasi hingga pH 9.0 dengan 0.1 N NaOH.
10) Catat volume titrasi. Ini adalah titer kosong, B.
F. Perhitungan:
1. Definisi: Satu Unit Pencernaan Gelatin adalah jumlah enzim yang akan dibebaskan, setelah 20 menit pencernaan pada suhu 45 derajat, 1 mg nitrogen amino dari larutan gelatin standar pada pH 4,5 atau pH 5,5 (GDU pH 4,5 atau pH 5,5).
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Di mana: T=Titer uji (ml 0.1 N NaOH) B=Titer kosong (ml 0,1 N NaOH) N=Normalitas NaOH standar (yaitu 0,100) Wt (g)=Berat awal enzim
G. Parameter Pengujian:
1. Sediaan enzim diencerkan hingga konsentrasi sekitar 0.001 g/ml (1 mg/ml) atau untuk konsentrat bubuk enzim bromelain kira-kira 1-2 GDU/ml. Bahan Referensi diuji dengan setiap proses untuk memastikan akurasi metode.
Guanjie menyediakan bubuk bromelain curah, menggunakan metode uji GDU. Proses produksi kami beroperasi di bawah bengkel standar CGMP, menggunakan tiga jalur produksi di dua pabrik, dan dua laboratorium independen. Untuk setiap pertanyaan tentang produk kami, silahkan hubungi kami diinfo@gybiotech.com.
